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常見問題FAQ

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檢測(cè)螢光素酶反應(yīng)結(jié)果時(shí)是否需要選擇檢測(cè)波長?

相關(guān)產(chǎn)品目錄號(hào):E1910,E1501,E2920,N1110,G7570,G8090

產(chǎn)品分類:螢光素酶報(bào)告基因技術(shù)及應(yīng)用

問題類型:操作答疑

產(chǎn)品關(guān)鍵詞:螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè),儀器設(shè)置

螢光素酶檢測(cè)不需要選擇檢測(cè)波長的原因:

發(fā)光反應(yīng)的檢測(cè)指標(biāo)并不來自樣品本身。發(fā)光反應(yīng)中檢測(cè)的光信號(hào),是作為反應(yīng)的副產(chǎn)物產(chǎn)生的。在螢光素酶反應(yīng)中(生物發(fā)光反應(yīng)),螢光素酶(例如螢火蟲螢光素酶,海腎螢光素酶或者NanoLuc?螢光素酶)催化底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物,反應(yīng)中的一部分能量,以光的形式釋放。我們檢測(cè)中用到的樣品,通常是真核生物來源的細(xì)胞、組織等等。


由于大多數(shù)真核生物不發(fā)光,通常來說,來自樣品自身的背景光非常低。這意味著,在螢光素酶檢測(cè)中不需要濾除來自樣品的任何光。螢光素酶反應(yīng)的確會(huì)在某個(gè)特定波長下有最大的發(fā)光強(qiáng)度,但是螢光素酶反應(yīng)的發(fā)光光譜通常都相當(dāng)寬,在許多波長下都有發(fā)光。因此,如果只選擇在最大波長處檢測(cè)發(fā)光,過濾掉其他發(fā)光信號(hào),意味著檢測(cè)會(huì)丟掉很多信號(hào),丟失靈敏度。所以,實(shí)際上大多數(shù)發(fā)光檢測(cè)儀器會(huì)在檢測(cè)發(fā)光反應(yīng)時(shí)收集整個(gè)可見光譜(大約為380–780 nm)中的所有光。這可以確保在檢測(cè)背景值低的同時(shí)有非常好的靈敏度。